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Il est par contre plus simple d’utiliser un éluant binaire puisque la polarité variera en fonction de la quantité d’un solvant polaire ajouté. Les solvants polaire, aussi appelé solvants modificateurs (solvant B), communément utilisés sont le chloroforme, le dichlorométhane, l’acétate d’éthyle, le tétrahydrofurane, le méthyl tert-butyl éther (MTBE), l’éther diéthylique ainsi que des alcools comme le méthanol ou l’isopropanol. Un autre facteur important concernant la phase mobile est la force du solvant. Puisque la technique est basée sur les différentes interactions entre les analytes, la phase mobile et la phase stationnaire, il est donc important d’ajuster la force de l’éluant, que l’on définit par l’affinité de la phase mobile pour la phase stationnaire. Ainsi, un solvant dont la force d’élution est supérieure à une autre aura plus de facilité à entrainer un analyte dans la phase mobile, puisque ses interactions seront plus fortes avec la phase stationnaire. Aucune échelle absolue de force de solvants n’existe puisque celle-ci varie d’une colonne à l’autre. Par contre, plusieurs échelles empiriques permettent de classer les solvants dans un ordre correspondant à leur force de solvant (ɛ0). Pour un mélange de solvant, la force de solvant n’augmente pas linéairement avec le pourcentage de solvant polaire ajouté. Il peut par contre être calculé à l’aide de l’équation suivante :
Sources : fr.wikipedia.org
Où εAB est la force du mélange de solvant, εA et εB la force de solvant de chacun des solvants purs A et B respectivement, NB la fraction molaire et nB la surface moléculaire du solvant modificateur et α le coefficient d’activité, habituellement 1 pour une colonne analytique moderne. Lorsqu’on veut optimiser une séparation, il est important de conserver la même force de solvant après changement de solvant B. Sélectivité du solvant La sélectivité du solvant est l’ensemble des interactions acide-base, dipôle-dipôle et liaisons hydrogène entre les molécules de solvant et l’analyte. Il y a un changement dans la sélectivité du solvant quand les interactions moléculaires entre la phase stationnaire, le soluté et la phase mobile changent brusquement avec le changement de solvant. La sélectivité du solvant est basée sur le triangle de sélectivité de Snyder, qui guide le choix du solvant ou des solvants à choisir ainsi que la phase stationnaire pour optimiser la séparation de l’analyte. Chaque apex du triangle représente une caractéristique d’un solvant, soit accepteur de proton, donneur de proton ou ayant un dipôle. Les solvants sont classés dans le triangle, de façon à les catégoriser selon les interactions possibles du solvant avec l’analyte. Pour changer subitement les interactions entre le solvant et les analytes, il suffit de passer d’un solvant près d’un apex du triangle vers un solvant qui se situe plus près d’un autre apex.
Sources : fr.wikipedia.org
L’effet de localisation est un effet non négligeable en NPLC. Lorsqu’un soluté polaire peut faire des interactions fortes (dipôle ou pont hydrogène) avec les groupements fonctionnels en surface de la silice, on dit que le soluté se « localise ». En effet, un soluté a une capacité de localisation qui est donnée en fonction de la surface efficace du groupement en surface de la silice. Cette surface peut être réduite par l’action du solvant modificateur, qui exerce, en compétition avec le soluté, des interactions fortes du même type. Plus le solvant a d’interactions avec les groupements en surface, plus la rétention du soluté est diminuée. Le solvant peut donc éluer plus rapidement un soluté dans la colonne si ses interactions avec la phase stationnaire sont suffisantes pour contrer celles du soluté; on dit qu’il a un effet de délocalisation. Parfois, l’effet de délocalisation est prédominant par rapport à l’acidité, la basicité ou la dipolarité d’un solvant. Il a donc un effet majeur sur la rétention des solutés. Effets secondaires de solvant Un autre type d’effets concernent les interactions entre le solvant et le soluté. On les appelle les effets secondaires de solvant. Ces effets peuvent, dans certains cas, améliorer la rétention des solutés, dans d’autres, y nuire. Un premier type d’effet secondaire de solvant est lorsque le solvant interagit directement avec le soluté. La force de rétention est donc répartie et la phase stationnaire a de la difficulté à contrer ces effets, ce qui engendre une diminution de la rétention.
Sources : fr.wikipedia.org
Un deuxième effet secondaire se produit lorsque la concentration du solvant modificateur est supérieure dans la phase stationnaire que dans la phase mobile. Lorsque le soluté fait des interactions fortes avec le solvant modificateur, cet effet est bénéfique et augmente la rétention du soluté. Un troisième effet secondaire consiste en une force si grande entre le solvant modificateur et la phase stationnaire que le solvant modificateur est stériquement entravé, ce qui diminue la rétention étant donné que le solvant modificateur dans la phase mobile peut toujours faire des interactions avec le soluté.
Sources : fr.wikipedia.org
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